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原理分光光度法分析的原理是利用物質對不同波長光的選擇吸收現象來進行物質的定性和定量分析，通過對吸收光譜的分析，判斷物質的結構及化學組成。本儀器是根據相對測量原理工作的，即選定某一溶劑（蒸餾水、空氣或試樣）作為參比溶液，并設定它的透射比（即透過率T），而被測試樣的透射比是相對于該參比溶液而得到的。透射比（透過率T）的變化和被測物質的濃度有一定函數關系，在一定的范圍內，它符合朗伯—比耳定律。

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